探索大鼠AA对金铁锁总皂苷抗炎作用的反应性    【摘要】  目的  通过实验观察和探讨金铁锁总皂苷(TSPT)抗炎作用及其作用机理。方法  建立佐剂性关节炎(AA)动物模型,通过观察TSPT对AA大鼠足肿胀及炎性组织液中丙二醛(MDA)水平的影响来探讨其抗炎作用及其作用机制。结果  TSPT能有效抑制AA大鼠足肿胀,降低炎性组织液中MDA的水平。结论  TSPT具有良好的抗炎作用,其作用机制与降低MDA水平有关。
    【关键词】  金铁锁总皂苷  佐剂性关节炎  MDA
    【Abstract】  Objective  To observe the anti-inflammation effects and possible mechanism of Total Saponins of Psammosilene tunicoids (TSPT) .Methods  After establishing AA rats model, the TSPT's anti-inflammatory effects and mechanism against AA  was studied through observing changes of the ankle swelling and contents of MDA in inflammatory-tissue soak of AA rats.Results  TSPT could inhibit articular swelling and effectively decrease the content of MDA in inflammatory tissue soak of AA rats.Conclusion  TSPT has good anti-inflammation effects and the mechanism is likely related to TSPT's  down-regulation of MDA.
    【Key words】  TSPT  AA  MDA
    金铁锁(苗语:Jenb tieeg sox)系苗族习用药材[1],首载于《滇南本草》,为石竹科植物金铁锁Psammosilene tunicoides.W.C.Wu et C.Y.Wu的干燥根。别名:独定子、对叶七、白马分鬃等,主要含皂苷类成分。具有散瘀定痛、止血、消痈排脓之功,用于跌打损伤,风湿痛、胃痛、创伤出血等的治疗[2]。目前尚关于其抗AA研究的文献报道,本文就关于金铁锁总皂苷抗AA作用的研究作一介绍。
    1  材料与方法
    1.1  材料  Freund's完全佐剂(sigma公司产品,由帮定生物技术公司提供),注射器(1.0ml),金铁锁总皂苷(贵阳中医学院制剂教研室提取),地塞米松注射液(批号:0206101,天津金辉氨基酸有限公司提供),风湿宁注射液(批号504002,罗浮山药业提供),TSPT(贵阳中医学院制剂教研室提取)。
    动物:70只雄性Wistar大鼠,体重:(200±30)g,清洁级二级动物(由军事医学科学院动物中心提供)。
    1.2  实验方法
    1.2.1 分组   70只Wistar雄性大鼠,随机分为7个组。分别为:生理盐水组(NS)、模型组(A)、西药阳性对照组(地塞米松注射液)(B)、中药阳性对照组(风湿宁注射液)(C)、TSPT大(D)、中(E)、小(F)剂量组。
    1.2.2  造模  除NS组外,其余各组于每只大鼠右后足跖皮内注射Freund's完全佐剂0.1ml致炎。第1天记录大鼠的体重和两侧脚踝关节的周长。
    1.2.3  给药  除NS组外,其余均按上述方法造模,于造模后第9天开始给药,连续给药12天。每隔3天,记录各组大鼠体重,及踝关节肿胀,末次给药(造模后第21天)1h后处死大鼠,观察药物对继发性病变的影响。
    2  结果
    2.1  TSPT 对AA大鼠足肿胀的影响  足肿胀的测量方法:用记号笔标记肿胀踝关节周径,每日以特制软皮尺测量踝关节周长(软皮尺无弹性,最小刻度为0.1cm)。实验结果见表1。
    统计结果分析:实验结果表明,与生理盐水比较,造模后第8天(药前)各组足均明显肿胀(P<0.01),表明造模成功。用药约1周后,TSPT大、中剂量对足肿胀均显示出明显的抑制作用(P<0.01),作用强度大于中药阳性组(风湿宁注射液),接近地塞米松组。提示:TSPT能有效抑制AA大鼠踝关节的炎症反应。
    2.2  大鼠致炎足中丙二醛(MDA)生成量的测定  动物造模分组给药同上。鼠致炎21天后处死,在致炎侧关节上方0.5cm处摘取肿胀足爪,纵向切开,放入5ml生理盐水的试管中4 ℃浸泡过夜,离心(3000r/min)取上清液,-20℃保存待测。
    试剂与仪器:MDA试剂盒(由北京帮定生物技术公司提供),可见分光光度计(岛津:FW/UV265)(由北京武警总医院制剂科提供)、恒温水浴锅、离心机(由北京武警总医院检验科提供)。
    测定方法及参数:硫代巴比妥酸结合法,于532nm处测定,实验操作方法严格按照试剂盒说明进行。
    2.3  统计学方法  实验结果以(x±s)表示,采用t检验。如表2。
    表1  TSPT对AA大鼠足肿胀的影响  (n=10, x±s)
    注:与NS组比较:***P<0.01;与模型组(A组)比较:★★P<0.05,★★★P<0.01;与西阳组比较(B):△△P<0.05,△△△P<0.01。与中阳(C)组比较:※※P<0.05,※※※P<0.01
    表2  TSPT对AA大鼠炎性组织液中MDA的影响   (n=6,x±s)
    注:与NS组比较:**P<0.05;***P<0.01; 与模型组(A)比较:★★P<0.05,★★★P<0.01; 与西阳组比较(B):△△P<0.05,△△△P<0.01;与中阳组比较:※※P<0.05
    图1  TSPT对MDA水平的影响图
    由图表统计分析可知:与NS组比较,模型组炎性组织液中,MDA的含量显着升高(P<0.01),这显示出AA大鼠出现严重的炎性反应。经治疗后,与模型组比较,各个给药组AA大鼠炎性组织液中MDA含量均有不同程度的降低,B(西阳组)、D(TSPT大剂量组)表现出差异有非常显着性(P<0.01)。
    3  讨论
    MDA通过酶系统和非酶系统产生氧自由基,自由基可引起脂质过氧化,影响一些基因的表达,在炎症和免疫过程中起着中介作用[3]。因此自由基在生物体系中的作用正受到广泛重视。在正常情况下,机体内仅产生少量氧自由基,其产生、利用和清除保持一种动态平衡。一旦由于某种原因造成体内自由基的堆积,便会损伤组织细胞,导致各种病理变化。
    AA大鼠炎症反应中,模型对照组炎性组织液中MDA含量显着升高与AA大鼠足肿胀呈正相关,表明致炎因子使机体产生过量的氧自由基。这些活性氧可直接作用于一些细胞包括免疫细胞,与其脂质、蛋白质、核酸等发生反应,引起脂质过氧化,使MDA增多,造成细胞毒性和功能受损。MDA的增多会造成自由基连锁反应加强,使炎症加重或发展。经TSPT治疗后,大鼠炎性组织中MDA的含量降低,表明TSPT能抑制或阻断炎症时氧自由基的过量产生与释放,减轻氧化应激反应与脂质过氧化,使其终产物MDA降低,并接近正常组水平,因而减少了对细胞的损伤,纠正体内氧自由基代谢失衡或紊乱的作用,调整机体内环境,起到消炎、抗氧化和细胞保护作用,促进了炎症反应的消退。TSPT抗炎免疫的作用机理是多方面的,本实验结果提示,TSPT对AA大鼠炎症时氧自由基代谢的调整作用,可能是其中一个重要环节,对AA大鼠的抗关节炎作用可能与其降低脂质过氧化,恢复抗氧化酶活性和腹腔Mφ分泌功能等有关。
    【参考文献】
    1  包骏,冉懋雄. 贵州苗族医药研究与开发. 贵阳:贵州科技出版社,1999,174.
    2  中华本草编委会. 中华本草. 第二卷.上海:上海科学技术出版社, 1999,782.
    3  莫简.关于自由基在生物体系中作用的几点看法.第四军医大学学报,1997,18(2):199.

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